生物藥用蛋白制劑不溶性微粒異物檢測(cè)探討

一、案例分析說明

首先我們來了解什么是生物藥用蛋白制劑：

生物藥用蛋白制劑是指用于預(yù)防、治療和診斷的蛋白質(zhì)類物質(zhì)生物藥物，比如胰島素、內(nèi)啡肽等等，與小分子藥物相比，蛋白質(zhì)藥物具有高活性、特異性強(qiáng)、低毒性、有利于臨床應(yīng)用的特點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

生物蛋白制劑同樣需要檢測(cè)澄清度、不溶性微粒、可見異物（參考《中國(guó)藥典2020版》）。本文通過某生物醫(yī)藥公司藥用蛋白制劑的3個(gè)檢測(cè)指標(biāo)，來進(jìn)行顆粒物案例分析。

二、檢測(cè)方法和結(jié)果

待檢樣品：某生物醫(yī)藥公司藥用蛋白制劑

檢測(cè)方法：依據(jù)《中國(guó)藥典2020版》0902澄清度檢查；0903不溶性微粒檢查；0904可見異物檢查。

0902 澄清度檢查

檢查目的：比較不同批次樣品的澄清度

檢查方法：中國(guó)藥典0902第一法（目視法）

儀器設(shè)備：HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈

測(cè)試流程：

1，樣品準(zhǔn)備：不同編號(hào)樣品（A、B、C、D）于冰箱中取出。

2，檢測(cè)過程：開啟HN-200A澄清度檢查傘棚燈電源，調(diào)節(jié)白色光源旋鈕，經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)照度計(jì)測(cè)量，將燈光強(qiáng)度調(diào)節(jié)至1000 lx±10%范圍，將待測(cè)樣品置于目視窗口，人眼水平觀察。

測(cè)試結(jié)果：

圖1顯示的是不同編號(hào)蛋白制劑樣品在HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈下的實(shí)物照片，從中可以看到樣品A的澄清度最差，樣品D具有*佳的澄清度。

圖1.不同樣品在HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈下的實(shí)物照片

0903 不溶性微粒檢查

檢查目的：檢測(cè)藥用蛋白制劑中的不溶性微粒數(shù)量

檢查方法：中國(guó)藥典0903第二法（顯微計(jì)數(shù)法）

儀器設(shè)備：YH-MIP-0103顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀

測(cè)試流程：

1，樣品準(zhǔn)備：取0.45μm微孔濾膜 (直徑13 mm)置于過濾裝置上，將0.4 mL待測(cè)樣品倒入過濾裝置，進(jìn)行抽離過濾；過濾結(jié)束后，將濾膜轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，于低溫下烘干。

2，檢測(cè)過程：樣品濾膜取出后放入到YH-MIP-0103顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀的測(cè)試臺(tái)上，調(diào)整測(cè)試參數(shù)，于100倍的放大倍率下進(jìn)行聚焦掃描，測(cè)試結(jié)束后得到一張包含樣品不溶性微粒的大圖以及詳細(xì)的粒子粒徑和數(shù)量報(bào)告。

測(cè)試結(jié)果：

 由于測(cè)試樣品體積為0.4 mL，故其測(cè)試結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)藥典-0903不溶性微粒檢查》章節(jié)中小容量體積的標(biāo)準(zhǔn)。

表一：《中國(guó)藥典-0903不溶性微粒檢查》結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

在此章節(jié)中，藥典規(guī)定：光阻法不適用于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的注射劑。當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或者供試品不適于光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。

測(cè)試數(shù)據(jù):

表二：不同樣品的不同尺寸范圍微粒的數(shù)量及判定結(jié)果

   以上A、B、C、D樣品不溶性微粒的測(cè)試結(jié)果表明該系列樣品中的不溶性微粒檢測(cè)符合《中國(guó)藥典-0903不溶性微粒檢測(cè)》章節(jié)中的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。從不同樣品的不溶性微粒的測(cè)試結(jié)果來看，可以看到樣品A中尺寸≥25 μm的粒子數(shù)量最多，而D樣品中尺寸≥25 μm的粒子數(shù)量最少，這與澄清度檢查章節(jié)中的測(cè)試結(jié)果具有很好的關(guān)聯(lián)性。

圖2為樣品A的顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒掃描的全局圖以及部分圖，從圖2 (b)、(c)中可以清晰地觀察到樣品制劑里面的不溶性微粒的形狀，表明該測(cè)試結(jié)果可以作為輔助手段鑒別不溶性微粒的來源。

圖2.樣品A顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒檢測(cè)全局圖片(a)，部分圖片 (b) (c)。

0904 可見異物檢查

檢查目的：觀察樣品制劑中的可見異物

檢查方法：中國(guó)藥典0904第一法（燈檢法）

儀器設(shè)備：Lu -200A可見異物檢查專用傘棚燈

測(cè)試流程：

1、儀器準(zhǔn)備：進(jìn)行可見異物檢測(cè)時(shí)應(yīng)避免引入可見異物，測(cè)試環(huán)境應(yīng)為無菌無塵環(huán)境。檢測(cè)前應(yīng)對(duì)容器外壁進(jìn)行擦拭，必要時(shí)將藥液轉(zhuǎn)移至潔凈透明的適宜容器中進(jìn)行觀察。

2、檢測(cè)過程：打開Lu -200A可見異物檢查專用傘棚燈，調(diào)節(jié)光源的光亮強(qiáng)度，配用照度計(jì)，將儀器的光強(qiáng)調(diào)節(jié)至1000 lx-1500 lx，將樣品置于遮光板邊緣處，手持容器頸部，輕輕反轉(zhuǎn)以避免產(chǎn)生氣泡，隨后進(jìn)行觀察。

測(cè)試結(jié)果：

可見異物系指存在于注射劑、眼用液體制劑和無菌原料藥中，在規(guī)定條件下目視可以觀測(cè)到的不溶性物質(zhì)，其尺寸大于50 μm。下表為《中國(guó)藥典》0904章節(jié)中對(duì)于注射液無菌制劑中不溶性微粒數(shù)量的判定要求。

圖3為不同樣品在Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈下的實(shí)物圖，可以清晰地觀察到樣品溶液中存在可見異物，并且其中的可見異物數(shù)量超過藥典中的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，其中樣品A中的可見異物最多，這與該系列樣品的不溶性微粒測(cè)試結(jié)果相一致。

圖3. 不同樣品在Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈下的實(shí)物圖

三、 檢測(cè)總結(jié)果

經(jīng)過對(duì)上述生物蛋白制劑微粒異物檢測(cè)分析可以得出以下結(jié)論：該生物蛋白質(zhì)劑經(jīng)過澄清度檢查、不溶性微粒檢查以及可見異物檢查之后，雖然該生物制劑的不溶性微粒檢查結(jié)果已經(jīng)達(dá)到了《中國(guó)藥典》中相關(guān)章節(jié)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，但是其可見異物檢查觀察到的粒子數(shù)量已超過《中國(guó)藥典》中的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。

以上的測(cè)試結(jié)果表明HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈、YH-MIP-0103顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀、Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈均可對(duì)生物藥用蛋白制劑中的微粒異物進(jìn)行有效的檢測(cè)，并且三項(xiàng)測(cè)試得到的測(cè)試結(jié)果具有很好的一致性，表明以上儀器均符合《中國(guó)藥典》中相關(guān)檢查的儀器要求。